产品简介:
在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素FITC标记,以标记了的Annexin V作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。
本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测(不推荐用于检测组织样本)。
产品组分:
产品编号 | 产品名称 | BL107S | BL107A | BL107B |
1 | AnnexinV-FITC | 100uL | 250uL | 500uL |
2 | Propidium Iodide | 100uL | 250uL | 500uL |
3 | Binding Buffer | 10mL | 25mL | 50mL |
使用方法:
1、悬浮细胞离心(2000rpm 离心5min)收集;贴壁细胞用不含EDTA的胰酶消化收集(注:胰酶消化时间不易过长,否则容易引起假阳性);
2、用PBS洗涤细胞二次(2000rpm离心5min)收集1~5×105细胞;
3、加入500uL的Binding Buffer悬浮细胞;
4、加入5uL Annexin V-FITC 混匀后,加入5uL Propidium Iodide,混匀;
5、室温、避光、反应5~15min;
6、请在1h 内,进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。
A.荧光显微镜观察
1、将细胞于盖玻片上生长,用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡,并设立阴性对照组;
2、用PBS洗涤细胞两次;
3、在500uL的Binding Buffer 中加入5uL Annexin V-FITC,5uL Propidium Iodide,混匀;
4、将上述溶液滴加于盖玻片表面,使盖玻片表面均匀覆盖;
5、避光、室温反应5min。
6、将盖玻片倒置于载玻片上,于荧光显微镜下、双色滤光片(FITC和罗丹明)观察。Annexin V-FITC 荧光信号呈绿色,PI 荧光信号呈红色。
1) 用流式细胞仪检测,激发波长Ex=488 nm;发射波长Em=530 nm。
2) Annexin V-FITC的绿色荧光通过FITC通道(FL1)检测;PI红色荧光(流式Ex=488nm,Em≥630nm)通过FL2或FL3通道检测,建议使用FL3。
3) 荧光补偿调节:使用经凋亡诱导处理的正常细胞,作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。
C.实验范例
用凋亡诱导剂诱导 P388 细胞凋亡,在 37℃,5%CO2 培养箱培养4~6h 后,参照说明书的操作方法进行检测, 经流式细胞仪检测结果见下图。
对照 诱导剂处理
注意事项:
1、微量试剂取用前请离心收集。
2、Annexin V-FITC,Propidium Iodide(PI)避光保存及使用。
3、Propidium Iodide(PI)有毒,操作时要戴手套。
4、本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低1×105,不推荐用于检测组织样本。
5、推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,需用不含EDTA的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中,防止进一步的损伤。
6、细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7、因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
8、本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
9、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
保存条件:
2-8℃避光保存,一年有效。
货号 | BL107S |
规格 | 20T |
品牌 | Biosharp |
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