荧光定量PCR试剂盒(SYBR Green qPCR Mix)

荧光定量PCR试剂盒(SYBR Green qPCR Mix)

¥550.00

货号:BL698A

规格:5x1mL

品牌:Biosharp

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Quantity:

本产品是采用 SYBR Green I 嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂,将热启动Taq DNA聚合酶、dNTPSYBR Green I等试剂预混成即用的2x Mix,可对目标cDNA进行快速并具有高特异性的定量检测。本产品采用化学修饰的Hot Start Taq DNA聚合酶,在 50 ℃以下无活性,只有 95 ℃条件下加热后才能完全恢复酶的活力,最大限度减少非特异性扩增产物的产生,提高荧光定量PCR反应的精确性。该试剂盒独特的反应缓冲液,可在宽范围中得到良好的扩增结果、检测灵敏度更高、信号更强。

 

产品组分:

产品编号

产品名称

规格

1

2×SYBR Green qPCR Mix

5 x 1ml

2

50×ROX Reference Dye

1ml

 

保存条件

收到本产品后,请立即置于-20℃避光保存,一年有效28℃条件下储存6个月避免反复多次冻融。

 

使用说明

一、配制 Real-Time PCR反应体系:

1、将所有试剂2×SYBR Green qPCR MixROX Reference Dye,模板,引物和RNase-Free ddH2O,在室温下融解并彻底混匀避免产生气泡短暂离心后,置于冰上按照下表配制反应液。

参考下表配制反应体系:

组分

20ul体系

50ul体系

终浓度

SYBR Green qPCR Mix

10μl

25 μl

Primer F (10 μM)*

0.4~0.8 μl

1.5 μl

0.2~0.4 uM*

Primer R (10 μM)*

0.4~0.8 μl

1.5 μl

0.2~0.4 uM*

50 x ROX Reference Dye**

cDNA模板

--

RNase-Free ddH2O

20 μl

50 μl

 

一般来说反应体系中引物终浓度为0.2 uM即可得到较好的扩增效果。当反应性能比较差时,可以在终浓度0.2~0.4 uM范围内调整引物浓度。

** 几种常见仪器的最适ROX Reference Dye浓度见下表:

仪器型号

使用浓度

ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/StepOne/ StepOne Plus

20ul体系加2ul50ul体系加5ul

ABI 7500/7500 FastQuantStudio ® 3/5QuantStudio 6/7 FlexViiA 7Stratagene Mx3000P/Mx3005PMx4000

20ul体系加0.4ul50ul体系加1ul

RocheBio-RadEppendorf

无需添加

 

2、盖上或密封反应管/PCR板,轻轻混匀。短暂离心,确保所有组分都在管/板底。

二、进行Real-Time PCR反应

1建议采用两步法PCR反应程序进行反应。

两步法反应程序:

步骤

温度

持续时间

循环数

预变性

95℃

5min

1

变性

95℃

10sec

40

退火延伸数据采集

60℃

30sec

40

熔解曲线分析

根据仪器推荐程序设置

 

若模板量较低等因素导致扩增效果不佳,可使用三步法程序进行PCR反应。

三步法反应程序:

步骤

温度

持续时间

循环数

预变性

95℃

5min

1

变性

95℃

10sec

40

退火

50-60℃

30sec

40

延伸数据采集

72℃

30sec

40

熔解曲线分析

根据仪器推荐程序设置

 

2上机检测:将反应体系置于荧光定量 PCR 仪中,运行程序收集数据并分析结果。

货号 BL698A
规格 5x1mL
品牌 Biosharp
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