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Lip2000转染试剂[BL623B]

品牌:biosharp

编号:BL623B

名称:Lip2000转染试剂[BL623B]

规格:1ml

价格:600.00

说明书:

Lip2000Transfection Reagent


产品简介 :

Lip2000 是一种新型的阳离子脂质体转染试剂。适合于将核酸(DNA 和 RNA)转染入真核细胞,具有低细胞毒性;对多种类型的细胞都具有高转染效率;转染时血清的存在不影响转染效率的优点。


适用范围:贴壁细胞和悬浮细胞(哺乳动物细胞系)的转染。

质粒 DNA  的转染 :对大多数细胞来说,DNA(µg)与 Lip2000(µl)的比例为 1:2~1:3。转染时高的细胞密度可以得到高的转染效率和表达水平,并能减少细胞毒性。

1、以 24 孔板为例

贴壁细胞: 转染前一天,用 500µl 不含抗生素的培养基接种 0.5-2×10 5 细胞,使之第二天能达到 70-90%汇合。 悬浮细胞:在准备 DNA-Lip2000 复合物之前,用 500µl 不含抗生素的培养基接种 4-8×10 5 细胞即可。

2、对每个转染样品,进行以下操作

(1)在eppendorf管里分别加入50µl Opti-MEM I ReLipced Serum Medium和0.8 µg DNA,轻柔混匀,制成 DNA 稀释液。

(2)在另一个 eppendorf 管里分别加入 50µl Opti-MEM I ReLipced Serum Medium 和2.0µlLip2000(注意用前先混匀),轻柔混匀,制成 Lip2000稀释液,室温静置 5 分钟。

(3)将 DNA 稀释液和 Lip2000 稀释液混合,轻柔混匀,室温静置 20 分钟, 形成DNA-Lip2000复合物。DNA-Lip2000 复合物在室温下可稳定存在 6 小时。

3、将 DNA-Lip2000 复合物加入到接种好的细胞中,将培养板轻轻地前后摇动,使复合物分散均匀。

4、在 37℃ CO2 培养箱中培养 4-6 小时后更换培养基,继续培养 18-48小时。

5、如果要筛选稳定细胞株,则在转染 24 小时后将细胞按照 1:10 或更高的比例接种到新鲜培养基中,第二天加 入选择性培养基进行筛选。


质粒DNA转染的优化:为达到最高的转染效率和降低细胞毒性的影响,可以对 DNA和 Lip2000 的比例以及细胞密度进行优化,一般在 1:0.5~1:5 的范围内优化 DNA (µg)和Lip2000 (µl) 的比例。


不同细胞培养板中转染时培养基、核酸及 Lip2000 用量:

细胞

培养板

每孔面积

培养基用量

DNA 转染

siRNA

铺板培养基基用量

稀释培养基用量





96-well

0.3 cm2

100 ul

2 × 25 µl

0.2µg

0.5µl

5 pmol

0.25µl

24-well

2 cm2

500 ul

2× 50µl

0.8µg

2.0µl

20 pmol

1.0µl

12-well

4 cm2

1 ml

2× 100µl

1.6µg

4.0µl

40 pmol

2.0µl

6-well

10 cm2

2 ml

2× 250µl

4.0µg

10µl

100 pmol

5µl

60-mm

20 cm2

5 ml

2× 0.5 ml

8.0µg

20µl

200 pmol

10µl

10-cm

60 cm2

15 ml

2× 1.5 ml

24µg

60µl

600 pmol

30µl


保存条件:2-4℃保存一年(避免冷冻)。


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